小鼠肺微血管内皮细胞构成了一种半选择性屏障，为肺部气体交换、液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动提供了重要的支持。这一屏障不仅在肺功能中发挥着关键作用，还有助于执行某些代谢和非呼吸功能。在肺损伤的情况下，肺微血管内皮细胞是活性氧物质的关键靶细胞之一。在肺炎的发展过程中，神经体液介质和氧化剂对内皮细胞的影响会导致细胞间隙的渗透性增加，进而使蛋白质从血液渗透到间质中。宿主的低氧血症可能因此加剧，导致成人呼吸窘迫综合征及非心源性肺水肿的发生。

小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织，展现出上皮样、多角形的细胞特征。经过贴壁培养，并使用CD31免疫荧光染色鉴定，细胞的阳性率超过90%。在实验过程中，确保这些细胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母及真菌，将是对实验结果可靠性的重要保障。

实验所需仪器设备及试剂

MILE米乐在生物医疗领域提供先进的仪器和高质量的试剂。以下是本实验的具体要求：

1. 仪器设备

• 生物安全柜：BSC-1500ⅡA2-X
• 二氧化碳细胞培养箱：BC-J160S
• 荧光倒置显微镜：DS-Ri2
• 高速冷冻离心机：Multifuge X1R
• 电热恒温鼓风干燥箱：DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽：DK-2B

2.试剂耗材

• T25细胞培养瓶：430639
• 血球计数板：Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片：YA0350
• 细胞培养孔板：WHB-24
• 胎牛血清：1414426
• 内皮细胞培养基：Primed-icell-002
• 25%胰蛋白酶（含0.02% EDTA）：1734858

小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5至10天龄的小乳鼠浸泡在75%乙醇中后，转移至生物安全柜。
2) 从胸部解剖乳鼠，取出双肺，浸入预冷的PBS中，尽量去除结缔组织。
3) 剪取肺边缘部分，剪成小块，并将其放入T25培养瓶中，倒置置于细胞培养箱内。
4) 2小时后，向培养瓶中加入2 mL内皮培养基，并小心将培养瓶正置，确保组织块不漂浮。
5) 每3天更换2 mL培养液，当细胞从组织块中迁移出来后，改为每2天更换一次，待细胞融合至60-70%时，移除组织块，并将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

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