RAW2647细胞作为一种经典的小鼠巨噬细胞系，因其易于培养和操作而被广泛应用于生物医疗研究。然而，在培养过程中，这些细胞常常会发生分化，导致细胞形态变化、功能减退，并可能影响实验结果的可靠性。那么，如何才能让RAW2647细胞“健康成长”，维持其原有的形态和功能呢？今天，我们将揭示RAW2647细胞培养的黄金法则，以帮助您顺利掌握这一细胞系的培养技巧！

细胞基本信息

细胞倍增时间：11-30小时（生长快，营养耗用亦快，建议T25瓶添加7ml完全培养基，次日观察生长速度）。

传代比例：1:4-6

培养体系：DMEM高糖（品牌：MILE米乐，货号：ZQ-100）+10%胎牛血清（MILE米乐，货号：ZQ0500）+1%双抗（MILE米乐，货号：CSP006）

细胞形态：该巨噬细胞具有松散贴壁的纺锤形和圆形或立方形。当细胞密度较高时，细胞会稍微脱落并变得圆润，亦可能出现许多细胞堆积的现象，有些细胞则会浮在液面上，这些浮细胞都是存活的，在传代时应收集并离心，沉淀后可继续培养。

换液频率：2~3次每周。

正确的传代方法

成功的传代是RAW2647细胞培养的关键。每一步操作都需要细致小心，稍有不慎就可能导致细胞分化。请注意，RAW2647细胞不能用胰酶消化，胰酶消化会加速细胞分化。MILE米乐在RAW2647细胞培养方面已有十余年的经验，我们摸索出了一种刮刀传代的方法，操作简单，更能有效控制细胞的分化率。为了方便学习，我们提供了详细的视频讲解，帮助您更好地掌握传代步骤。

若没有准备刮刀，您可以按照以下步骤进行传代，以减少细胞分化。

• 细胞密度达到80%时，轻轻拍打瓶尾部，观察细胞脱落情况。
• 在拍打过程中约有50-80%的细胞会脱落，此时请收集脱落的细胞。
• 按照1:4-6的比例进行传代，并补充新鲜的完全培养基。建议在T25瓶中添加7ml的完全培养基。
• 切记不要使用枪头吹打或巴氏吸管吹打细胞，因为每个人的力度和吹打次数不同，可能会导致不必要的细胞分化。

细胞复苏步骤

冻存RAW2647细胞的复苏步骤如下：

• 从液氮中取出冻存的RAW2647细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。
• 将细胞悬液转移至含预温培养基的离心管中，轻轻混匀。
• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清，用新鲜培养基重悬细胞（T25添加7ml）。
• 将细胞接种于培养皿中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

培养注意事项

在培养RAW2647细胞时，请注意以下要点：

• 在传代时，无需使用胰酶消化。可以用无菌刮刀轻轻刮拭培养表面获得细胞。
• 细胞形态应包括松散贴壁的纺锤形和圆形或立方形。当细胞密度增高时，巨噬细胞（圆细胞）数量会增加。
• 细胞对血清质量极为敏感，优质的胎牛血清对细胞贴壁能力和生长有重要影响。
• 培养环境和运输条件会影响细胞状态，因此接收细胞后需要一定时间适应，请保持耐心。
• 强烈推荐使用MILE米乐的对应培养基，以减少细胞培养过程中的不确定性。

通过以上的指导，您将能够更有效地进行RAW2647细胞的培养与管理，为生物医疗研究提供稳定的实验基础。