MILE米乐的人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书提供了详细的细胞培养条件、处理步骤和注意事项，以确保细胞在实验中的活性与稳定性。

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：建议首次传代比例为1:2

二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，用完全培养液灌满瓶子并密封，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基再放入37℃、5% CO2 incubator；如细胞密度超80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞变圆并脱落，迅速回到操作台，轻拍培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml至培养瓶，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，将细胞沉淀与1ml MILE米乐的无血清冻存液（货号：C7001）混匀，转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需转入液氮罐中，应在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴解冻，直到无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会脱落，这属正常现象。如细胞脱落较多，可将培养液收集至离心管中，进行离心后重悬并处理。务必记录前期培养情况，以便后续对比。

五、售后条款

如果细胞出现问题，我们提供重发政策，具体情况需在48小时内提供真实的实验结果或照片。若因客户原因导致细胞状态不良，我们不予重发。