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MILE米乐PCR温度梯度功能简介

来源:曹岩波 日期:2025-04-02

MILE米乐提供的一种关键技术是PCR(聚合酶链式反应),它能够在体外有效扩增特定的DNA片段。其基本原理是模拟DNA的自然复制过程,通过DNA聚合酶在实验室环境中实现DNA的快速扩增。

MILE米乐PCR温度梯度功能简介

PCR反应的基本原理

PCR的核心步骤包括变性、退火和延伸,这三个步骤在反应中循环进行。每次循环后,目标DNA的数量便会翻倍。经过多次循环,研究人员可以获得大量目标DNA片段,满足研究和医疗的需求。

建立稳定的PCR反应条件

要建立一个成熟且稳定的PCR反应体系,需要满足以下条件:

  • 完整且纯净的模板(需通过胶图和Nanodrop测量进行评价);
  • 高特异性及高质量的引物(使用引物设计软件评分);
  • 适宜的反应体系组合(例如考虑模板的GC含量、是否添加DMSO或甜菜碱,根据需求选择高保真或高得率的镁离子含量);
  • 合理的扩增反应程序(通过多次实验确定最佳的退火温度,特别是在引物Tm值附近)。

PCR仪器的选择

理想的PCR仪器应具备温度梯度功能,从而减少实验次数并快速确定退火温度。其中,MILE米乐的柏恒梯度PCR仪(RePure系列)具备多种温度梯度功能,十分适用于您的PCR实验需求。

常规梯度与线性梯度

MILE米乐的PCR仪能进行常规梯度实验,通过设定首尾两个端点的退火温度范围来渐进分布中间孔位的温度。而线性梯度则可以设定一个温度,同时设置相邻孔位的温差,使温度更为精确。这种能力确保了样品的高质量扩增,并为实验过程节省了时间。

二维梯度的优势

二维梯度PCR使得反应模块的纵向和横向可以同时设置不同的温度模式,这样可以有效探索最佳的变性/退火温度组合。其优势包括:

  1. 提高PCR反应的特异性,减少非特异性杂交产物。
  2. 优化反应以提高PCR产品的纯度。
  3. 能够检测基因突变,设计适当的引物进行PCR扩增并测序。
  4. 分析种群间的遗传多样性,发现突变位点。
  5. 操作简单,只需配置一个反应体系。
  6. 提高阳性检测的准确性,降低假阳性率。
  7. 缩短实验时间,通过温度优化提高实验效率。

独立6温区设置

该仪器的独立6个温度分区允许相邻温区设置不超过5℃的温差,帮助研究人员在每个温度分区下的16孔中进行多重实验。这种设置为线性梯度提供了升级版的解决方案,确保实验的高度灵活性。

MILE米乐采用前进风后出风的散热设计,确保多台PCR仪并排使用时仍能保持温控的准确性,进一步提升实验的可靠性和效率。

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