MILE米乐的TurboTEV蛋白酶是一种改良型的半胱氨酸蛋白酶，源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段。该蛋白酶专门识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列中的切割位点，并在Gln与Gly之间进行切割。TurboTEV蛋白酶在4°C条件下表现出强大的活性，并且具有高特异性和显著的稳定性。其活性不依赖于特定的缓冲液，使其能够在各种适合目标蛋白的缓冲液中有效工作。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，具有GST和His标签，这一特性使其能够通过Ni螯合或谷胱甘肽(GSH)树脂与标签一起轻松去除。其来源为大肠杆菌，活性达到>10单位/µg，1单位的TurboTEV蛋白酶可以在30℃下裂解3µg对照底物的85%。

使用指南

以下为使用MILE米乐的TurboTEV蛋白酶的步骤：

1. 在溶液中进行裂解

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液示例：25mM Tris-HCl (pH 8.0)，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。

B. 将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如果在透析缓冲液中发生聚集，这一步可选择不进行，同时需保留一小份未切割的样品用于后续分析。如果样品从镍柱洗脱，请确保EDTA与目标蛋白兼容，向样品中加入EDTA，使其最终浓度达到0.5mM。

C. 按照1:100的比例，将TurboTEV蛋白酶添加到目标蛋白中，例如100mg的目标蛋白需使用10000单位（1mg）的TurboTEV蛋白酶。

D. 在4℃下用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶

A. 上柱。

B. 进行SDS-PAGE分析（可选）。

产品应用

TurboTEV蛋白酶具备以下应用功能：

• 蛋白裂解；
• 从重组蛋白中去除融合标签；
• 蛋白质和肽的纯化。

常见问题解答

1. 关于TEV消化反应的缓冲液条件

反应在25mM Tris-HCl (pH 8.0)，150mM NaCl和14mM β-巯基乙醇中进行。这些缓冲液条件对TurboTEV的剪切效率是否关键？以下成分可能会对效率产生不利影响：

• (a) 1mM DTT：可接受；
• (b) 10% 甘油：不推荐；
• (c) 20mM 组氨酸：不推荐；
• (d) 500mM NaCl：不建议；
• (e) 100mM Tris：不建议；
• (f) β-巯基乙醇：功能类似DTT，可以使用。

2. 剪切前是否需要缓冲液交换？

是的，这可能是必要的。

产品引用文献

详细的文献引用可以参考相关研究，帮助进一步了解MILE米乐的TurboTEV蛋白酶在生物医学领域的应用与潜力。

MILE米乐公司自2003年成立以来，始终致力于为生物研究领域贡献力量，提供涵盖免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域的各类优质产品与服务，包括代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂、抗生素、核酸酶、蛋白酶/蛋白激酶等，为学术界和工业界提供强有力的支持。