dsRNA在mRNA疫苗原液质量控制中的重要性

mRNA疫苗利用信使RNA（mRNA）的分子副本以激发免疫反应，其由脂质纳米颗粒（LNP）和包裹的RNA组成，能够保护RNA链并促进细胞摄取。随着新冠疫情的爆发，具有显著疗效、快速研发、低成本和安全性优势的mRNA疫苗技术得到了广泛关注。在mRNA疫苗的生产中，mRNA原液的制备和转录是关键步骤，其质量直接影响疫苗的临床效果。因此，控制与mRNA相关的杂质，如5’非帽化RNA、双链RNA（dsRNA）、长链RNA和截短RNA等，成为关键的质量标准。CDE的相关技术指导原则明确了这一要求，强调了对dsRNA等杂质含量的严格监控。

dsRNA的特性及其对免疫系统的影响

双链RNA（dsRNA）在mRNA疫苗的生产过程中可能作为副产品产生，其识别和免疫激活作用不容忽视。在IVT过程中，T7RNA聚合酶可能根据不同模板产生多种dsRNA副产物，这些dsRNA能够在细胞质中被RIG-1和MDA5等蛋白识别，激活干扰素的表达，进而影响免疫反应。此外，内体中的dsRNA杂质会被TLR3识别，也同样引起促炎性细胞因子的分泌。这些免疫反应一方面可能降低mRNA的翻译效率，另一方面则导致mRNA药物在重复给药时展现出免疫记忆，从而降低疗效。因此，生产过程中需对dsRNA含量进行严格的控制，以确保疫苗的安全性和有效性。

dsRNA的定量检测方法

目前，针对dsRNA的检测方法包括dot blot、ELISA、HTRF与HPLC等。其中，在USP《Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality（Draft Guidelines）》2nd Edition中推荐的检测方法为dot blot和ELISA。然而，HPLC法的分辨率和准确性较低，dot blot虽然操作简单，但灵敏度不高。ELISA以其高灵敏度（可达pg/mL级别）和操作便捷性，在医学实验和生物制药中广泛应用，成为目前成熟的免疫分析方法之一。双抗体夹心法的原理使其能够通过颜色变化与待测物浓度成正比，而结合生物素亲和素系统的改进则进一步提升了其灵敏度和便利性。在众多dsRNA检测策略中，开发一种同时具备特异性、灵敏度和普适性的dsRNA ELISA检测试剂盒，将更好地满足mRNA领域大规模生产与技术更新的需求。

基于修饰类型的dsRNA ELISA定量检测试剂盒的开发

在开发dsRNA ELISA定量检测试剂盒的过程中，由于缺乏标准物质，如何制备、定量和选择标准品成为首要任务。有些国外ELISA试剂盒使用polyI:C作为标准品，但由于其抗体识别反应的不同，可能导致dsRNA定量不准确。因此，需要自主研发序列随机、高纯度的dsRNA标准品，以确保其定量的准确性。mRNA疫苗的自免疫原性部分源自于残留的dsRNA杂质，且化学修饰核苷酸的引入能够降低mRNA的自免疫原性，是提升疫苗有效性的关键。针对不同修饰类型的dsRNA，采用相应的标准品确保定量的准确性，对提高检测试剂盒的可靠性至关重要。因此，MILE米乐致力于开发一款兼具稳定性、准确性和灵敏度的dsRNA ELISA定量检测试剂盒，以满足mRNA疫苗生产的高标准要求。